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EZBioscience彩色染料法qPCR試劑盒(預(yù)混 ROX2型)(A0012-R2)產(chǎn)品介紹

 更新時間:2024-03-01 點擊量:650

EZBioscience® 2× Color SYBR Green qPCR 預(yù)混液 (ROX2 plus) 使用經(jīng)過特殊修飾的 Taq DNA 聚合酶,該聚合酶受熱啟動保護活化技術(shù)和優(yōu)化的qPCR緩沖液系統(tǒng),以進行基于SYBR Green I的實時熒光定量PCR(qPCR)。該混合物補充了惰性紅色染料。以及 EZBioscience® 彩色逆轉(zhuǎn)錄試劑盒含有惰性藍色染料,以避免移液錯誤。在qPCR反應(yīng)中將cDNA和其他組分混合在一起,使溶液變成紫色。這在移液時提供了視覺幫助,并降低了反應(yīng)設(shè)置過程中移液錯誤的風(fēng)險,尤其是在使用白色反應(yīng)容器時。染料不影響qPCR反應(yīng)的特異性或靈敏度。該混合物以 2× 的反應(yīng)濃度制備,可直接用于高模板和低模板 qPCR,具有高靈敏度、特異性和可靠性。

常見問題及解決方法:

1. 陰性對照組可觀察到明顯擴增

原因:使用的試劑或水被污染、引物二聚體的外觀

解決方法:更換新試劑或水并重試。反應(yīng)應(yīng)在超凈臺架上進行,以盡量減少空氣污染、在35個周期后,陰性E對照組出現(xiàn)擴增是正常的可以結(jié)合熔融曲線進行分析

2. ct值出現(xiàn)太晚(大)

原因:放大效率低、模板的濃度太低、模板退化、擴增子太長、反應(yīng)中存在PCR抑制劑

解決方法:優(yōu)化反應(yīng),嘗試三步程序或重新設(shè)計引物、增加模板量,同時避免破壞擴增效果、準備新的模板,然后重試、擴增子的長度建議在100bp~200 bp之間、添加模板時通常會引入抑制劑,增加稀釋倍數(shù)或準備新模板并重試。

3. 擴增曲線形狀異常

原因:擴增曲線粗略、曲線斷裂、曲線突然下降

解決方法:信號弱而引起的系統(tǒng)整流,升高模板濃度并重復(fù)反應(yīng)、模板的濃度太高,基線的結(jié)束值大于Ct值,減少基線的末端(Ct值-4),并重新分析數(shù)據(jù)、反應(yīng)管中存在氣泡,當(dāng)溫度升高時,氣泡破裂,從而儀器檢測到熒光值的突然降低,快速旋轉(zhuǎn),仔細檢查反應(yīng)前是否有氣泡。

產(chǎn)品選購:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

A0012-R2

彩色染料法qPCR試盒(預(yù)混 ROX2)

5ml

 


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